Práctica 12. Antibiograma

OBJETIVOS

  •  El objetivo de esta práctica es aplicar las técnicas aprendidas sobre los antibiogramas.

FUNDAMENTOS

  • Se denomina así al conjunto de técnicas, empleadas en el laboratorio, para determinar "in vitro" el grado de sensibilidad de los microorganismos frente a la acción de distintos agentes antimicrobianos. Esto permite seleccionar el compuesto más adecuado para el tratamiento de una infección bacteriana.
  • Las pruebas más utilizadas se basan en el enfrentamiento “in vitro” del microorganismo, aislado de una muestra biológica, con distintas concentraciones del antimicrobiano.

MATERIALES
Agar Muëller-Hinton
Pinzas
Tira para Epsilon test
Discos antibiótico
SSF
Mechero Bunsen
Asa de siembra



MICROORGANISMO
Klebsiella


PROCEDIMIENTO

  • MÉTODO DE DIFUSIÓN EN AGAR

  1. Se prepara un cultivo de 18 horas, de las bacterias que hay que ensayar.
  2.  Se prepara un inoculo bacteriano, que consiste en suspender 3 o 4 colonias bacterianas del cultivo de 18 h. anterior, en 5ml de solución salina o de caldo de cultivo estéril, hasta lograr la turbidez equivalente al estándar 0,5 de McFarland.
  3.  Sumergir, en el inóculo, un hisopo de algodón.
  4.  Inocular la superficie de una placa de agar de Müeller-Hinton con el hisopo, pasándolo uniformemente por toda la superficie en tres direcciones.
  5. Por último pasar el hisopo por el reborde la placa de agar.
  6. Dejar secar 5 minutos.
  7.  Con unas pinzas estériles, colocar los discos de antibiótico sobre la superficie del agar apretándolos suavemente. Los discos no deben estar a menos de 15 mm de los bordes de la placa y lo bastante separados entre ellos para que no se superpongan las zonas de inhibición.
  8. . Dejar las placas 15 minutos a temperatura ambiente parar que comiencen a difundir los antibióticos.
  9.  Incubar la placa en posición invertida a 37° C durante 18-24 horas.

  • MÉTODO DEL EPSILON TEST

  1. Para esta técnica realizamos los mismos pasos anteriores hasta el número 6.
  2. Con unas pinzas estériles, colocamos la tira del E-test sobre la superficie del agar apretándolo suavemente.

  3. Dejamos la placa 15 minutos a temperatura ambiente.
  4. Incubamos la placa en posición invertida a 37ºC durante 18-24 horas.

RESULTADOS

  •  DIFUSIÓN EN AGAR

  1. Mediante una regla milimetrada se mide el diámetro del halo de inhibición para cada antibiótico (la zona circular sin crecimiento bacteriano que puede aparecer alrededor del disco). 
  2. A continuación se lleva el resultado de la medición a una tabla para establecer el grado de sensibilidad del microorganismo a ese antibiótico.  
    1. El microorganismo es sensible o susceptible (S) al antibiótico, cuando aparece un halo de inhibición de tamaño grande alrededor del disco (la bacteria no crece alrededor del antibiótico). Esto significa que el antibiótico será efectivo a las dosis terapéuticas habituales.
    2. Los microorganismos presentan sensibilidad intermedia(I) cuandoaparecen zonas de inhibición de tamaño moderado, las cuales indican un moderado grado de resistencia. Esto significa que se deben emplear dosis terapéuticas más elevadas de las habituales, siempre que su toxicidad o vía de administración lo permitan

  • EPSILON TEST

  1.  No hemos obtenido la CMI. Esto puede deberse a que el microorganismo sea resistente al antibiótico ulilizado.
  2.  Para obtener la CMI, deberíamos:

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