Práctica 6. Tinciones estructurales 18/10/2019

OBJETIVOS

•  El objetivo de esta práctica es realizar tinciones de esporas y cápsulas.

FUNDAMENTOS

• Tinción de esporas.
• Las esporas son formas de resistencia producidas por algunas bacterias, como los Bacillus. Presentan una pared impermeable que dificulta su tinción.
• Mediante el calor se fuerza la coloración de manera que una vez teñidas, se colora toda la bacteria pero no lo hace la espora.

MATERIALES

Colorantes para método de Anthony

Tinción de Burri

Verde Malaquita

Portaobjetos

Asa de siembra

Mechero Bunsen

MUESTRA

Bacillus Megaterium

PROCEDIMIENTO

• TINCIÓN DE ESPORAS. TINCIÓN DE WIRTZ

1. Depositamos una gota de agua sobre un portaobjetos.
2. Tomamos una muestra del cultivo de Bacillus y la extendemos sobre el agua.
   
3. Fijamos a la llama del mechero.
4. Una vez seca la preparación, la colocamos sobre las "paralelas" de hierro.
5. Cubrimos la preparación con verde malaquita.
   
6. Calentamos, con un hisopo de algodó empapado en alcohol y prendido con la llama del mechero, hasta la emisión de vapores. Debemos mantener las preparaciones calientes durante 5 minutos.
   
7. Lavamos con agua.
8. Teñimos con safranina durante 1 minuto.
   
9. Lavamos con agua y dejamos secar.
   

• TINCIÓN DE CÁPSULAS. MÉTODO DE ANTHONY

1. Depositamos una gota de agua sobre un portaobjetos.
2. Tomamos una muestra del cultivo de Bacillus y la extendemos sobre el agua. NO debemos fijar sobre la llama del mechero.
3. Una vez seca la preparación, la colocamos sobre las paralelas en una cubeta.
4. Añadimos cristal violeta durante 1 minuto.
5. Lavamos con solución saturada de sulfato de cobre al 20% para aumentar la refringencia de la cápsula.
6. Secamos al aire.
   

• TINCIÓN DE BURRI O DE LA TINTA CHINA.

1. Depositamos una gota de agua sobre un portaobjetos.
2. Tomamos una muestra del cultivo de Bacillus y la extendemos sobre el agua. NO debemos fijar sobre la llama del mechero.
3. Una vez seca la preparación, la colocamos sobre las paralelas en una cubeta.
4. Añadimos fucsina diluida durante 2 minutos y lavamos con agua destilada.
   
5. Secamos al aire.
   
6. Colocamos 2-3 gotas de nigrosina al 1% en un extremo del porta y la extendemos por le método de la cuña.
   
7. Dejamos secar.

RESULTADOS

•  ESPORAS. Las esporas se obsevan de color verde, mientras que las células vegetativas se observan de color rojo.
  
  
  
  
• CÁPSULAS. MÉTODO DE ANTHONY. La cápsula debería observarse como un halo transparante ligeramente azulado alrededor de la bacteria que se tiñe de violeta. En esta preparación pude observar las bacterias, pero no las cápsulas.
  
  
  
  
  
• CÁPSULAS. TINCIÓN DE BURRI. Sobre un fondo negro se observan los microorganismos reñidos de rojo y la cápsula como un halo blanco que los rodea.