Práctica 5. Tinción de Gram 17/10/2019

OBJETIVOS

•  El objetivo de esta práctica es aprender a diferenciar bacterias Gram (+) y Gram (-) en función de la distinta composición de su pared bacteriana.

FUNDAMENTOS

• Esta tinción utiliza distintos colorantes:
• Cristal violeta penetra en todas las células bacterianas a través de la pared bacteriana.
• Lugol: actúa de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad.
• Alcohol-acetona: sirve para realizar la decoloración.
• Safranina: se utiliza para poner de manifiesto las células gram negativas.

MATERIALES

Colorantes para tinción de Gram

Mechero Bunsen

Asa de siembra

Pipeta Pasteur

Portaobjetos

MUESTRA

Bacillus

PROCEDIMIENTO

• PREPARACIÓN Y EXTENSIÓN.

1. Colocamos sobre un portaobjetos limpio y desengrasado, una gota de SSF estéril.
2. Tomamos asépticamente con el asa una pequeña muestra del cultivo sólido y mezclamos con la gota de SSF para obtener una suspensión.
   
3. Extendemos la suspensión con el asa de platino previamente esterilizada y enfriada.
4. Dejamos secar la preparación calentando muy suavemente el porta.
   
5. Una vez seca la muestra, debemos fijarla utilizando calor. Esto se consigue pasando el porta tres veces por la llama azul del mechero.

• TINCIÓN.

1. Colocamos las preparación sobre las pararelas en una cubeta.
2. Cubrimos la preparación con cristal violeta durante 1 minuto y lavamos con agua destilada ligeramente.
   
3. Añadimos lugol durante 1 minuto y lavamos con agua destilada ligeramente.
   
4. Decoloramos con alcohol-acetona durante 20 segundos.
5. Lavamos con abundante agua destilada para que no queden restos de alcohol.
6. Añadimos safranina durante 1 min y 30 segundos.
   
7. Lavamos con abundante agua.
8. Secamos.
   

RESULTADOS

•  Examinamos con ayuda del microscopio, y obtenemos como resultado que las bacterias son gram positivas, ya que se veían de color azul/violeta aunque en las fotos no se aprecia correctamente.