Práctica 7. Pruebas bioquímicas 12/11/2019

OBJETIVOS

  •  El objetivo de esta práctica es aplicar las pruebas bioquímicas que hemos aprendido en clase. Estas técnicas son pruebas de identificación de cocos gram positivos.

MATERIALES
Discos de novobiocina
Pinzas
Vaselina líquida o parafina
Agua oxigenada
Asa de siembra
Mechero Bunsen

Portaobjetos

Agar DNAsa

Manitol





MUESTRA
Suero
S. Aureus


PROCEDIMIENTO

CATALASA

  1.  Depositamos sobre un portaobjetos una colonia de 24 horas, se añade ua gota de agua oxigenada al 3%, sin mezclar con el asa.
    1. Las colonias se deben tomar de un medio sin sandre, ya que los eritrocitos tienen actividad de catalasa y pueden falsear los resultados.
  2. El inmediato desprendimiento de burbujas se considera una prueba positiva:

OXIDO-FERMENTACIÓN

  1.   Se siembra la muestra, en picadura, en dos tubos que contienen el medio de Hugh Leifson (O/F) adicionado de un 1% glucosa.
  2. A uno de los tubos se añade parafina líquida estéril para conseguir condiciones anaerobias.
  3. Se incuban durante 24-48 horas a 37ºC.

  • INTERPRETACIÓN RESULTADOS 

  1. En los tubos que realizamos en clase no se puede observar claramente el color amarillo, puede deberse a la fecha de caducidad de los medios utilizados.

MANITOL

  1.  Esta prueba se realiza en el medio de Chapman, que contiene manitol y un 7,5% de NaCl.
  2. Debemos sembrar el microorganismo en este medio y esperar 24-48 horas, dejándolo incubar a 37ºC.

  • INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

  1. Cuando el microorganismo fermenta el manitol, vira a amarillo.
  2. Esta prueba no salió bien, esto puede deberse a la forma de sembrar el microorganismo, o la fecha de caducidad de los medios utilizados.

DNAsa

  1.  Esta técnica sirve para estudiar la capacidad que tienen algunas bacterias para producir el enzima DNAsa, que produce la degradación del DNA que contiene el medio de cultivo.
  2. En una placa que contiene Agar DNAsa, se siembra la muestra, haciendo una estría de unos 2 cm.
  3. Se incuba durante 24 horas a 37ºC.

  • INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

  1. Para realizar la lectura, se añade ácido HCl 1 N, y se observa la aparición de zonas claras o coloreadas de rosa, alrededor de la zona sembrada.
  2. En la práctica realizada en clase no se pudo observar ningún cambio en el medio al añadir HCl. Esto puede deberse al medio o al HCl utilizado.

COAGULASA

  1.  Esta tecnica estudia la capacidad que tiene el microorganismo para producir el enzima coagulasa que origina la coagulación del plasma humano.
  2. Se emulsionan varias colonias en un tubo de ensayo con 0,5 ml de plasma citratado.
  3. Se incuba a 37ºC.

  • INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

  1. Pasadas al menos 4 horas, podemos observar un coágulo total o parcial si la muestra es positiva.

SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA

  1. Esta técnica se basa en la resistencia que presentan algunas especies del género Staphylococcus a la novobiocina.
  2. Se siembra el microorganismo y se aplica el disco de novobiocina en el centro de la placa.
  3. Se incuba a 37ºC durante 24 horas.

  • INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

  1. La aparición de un halo de inhibición de crecimiento, menor o igual a 16 mm, corresponde a S. saprophyticus. Un halo de inhibición mayor de 16 mm corresponde a otros estafilococos coagulasa negativos.

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